產品內容：

儲存條件 

     4℃避光冷藏，請勿凍存。有效期見外包裝。

光譜特性
     Annexin V-APC: Ex/Em = 650/660 nm 

     PI: Ex/Em=535nm/617nm(with DNA)

產品介紹 

     Annexin V-APC/PI 細胞凋亡檢測試劑盒是用紅色熒光染料 APC（Allophycocyanin）標記的 Annexin V 作為探針， 來檢測細胞早期凋亡的發生，PI 用來檢測晚期凋亡細胞或者壞死細胞。因此將 Annexin V-APC 與 PI 聯合使用時，可以區分出早凋與晚凋細胞?？捎昧魇郊毎麅x或其他熒光檢測設備進行檢測。

使用方法 

     1. 根據實驗要求誘導細胞凋亡。檢測樣品中應包含未經處理的細胞樣品，作為陰性對照。此外，設定一組凋亡處理的樣品做單染，用于調節補償。

     2. 收集細胞 懸浮細胞：1000 rpm，離心 5 min 收集細胞；貼壁細胞：用不含 EDTA 的胰酶消化后 1000 rpm，離心 5min 收集細胞，胰酶消化時間不宜過長，以防引起假陽性。 對于特定的細胞，如果細胞無法完全離心至管底，可以適當 延長離心時間或稍稍加大離心力。此外，需小心吸除上清， 可以殘留約 50 μL 左右的培養液，以避免吸走細胞。 

注：用胰蛋白酶消化然后使細胞在最佳細胞培養條件和培養 基中恢復約 30 min，然后再染色，從而避免假陽性。

     3. 加入約 1 mL 4℃預冷的 PBS，重懸細胞，再次離心沉淀 細胞，小心吸除上清。

     4. 用 1×結合緩沖液重懸細胞，調節其濃度為 1-5×10^6/mL。 

     5. 取 100 μL 的細胞懸液于 5 mL 流式管中，加入 5 μL Annexin V-APC 和 5 μL PI ，混勻后室溫避光孵育 10-15 分鐘（推薦額外準備兩管凋亡細胞，每管中只加入一種染 料：Annexin V-APC 或 PI，用于流式單染的補償調節）。 

     6. 加入 400 μL 1× Annexin V 結合緩沖液，混勻，進行流式 檢測。Annexin V-APC 由 633 nm 激發，選擇 FL4 或 RL1 通道檢測，PI 由 488 nm 激發，選擇 FL3 或 BL3 通道檢測。

注意事項： 

     1. 熒光染料均存在淬滅問題，保存和使用過程中請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

     2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。